La méthode d'étude de la cellule

Résumé du document

12. Contraste

Il faut augmenter le contraste des échantillons biologiques car la cellule a une grande quantité d'eau et donc peu d'éléments font obstacle à la lumière : contraste très faible entre la cellule et son environnement. Il existe un retard de phase des ondes qui traversent la cellule.

Dans le cas des cellules non colorées, ce retard de phase est à l'origine du déphasage cependant l'intensité des ondes reste inchangée : peu de contraste donc observation difficile. Dans le cas de cellules colorées, il y a réduction d'amplitude des ondes qui traversent la cellule donc une différence de brillance créant un contraste. Par conséquent, l'observation est possible (...)

Extraits

[...] Cytofluorimétrie en flux et tri cellulaire Marquage des cellules par des fluorochromes couplés ou non à des anticorps. Analyse : mesure de la diffusion de la lumière et de la fluorescence de chaque cellule. Eventuellement : tri cellulaire 22. Séparation d'une population cellulaire par l'intermédiaire d'anticorps couplés à des billes magnétiques Liaison des billes magnétiques recouvertes d'anti-corps aux cellules possédant l'antigène à leur surface. Séparation des cellules liées aux billes par un aimant. C'est une alternative de la technique précédente, elle coûte moins cher. C. Fractionnement des composants cellulaires 1. [...]

[...] - Contraste en phase interférentiel : idem mais apparition de relief. - Fond noir : éclairage, tout le matériel lumière ne passe pas quand il y a un obstacle (fond clair quand il y a coloration) 2. Les différentes techniques 21. Microscopie à fond clair Coloration nécessaire Microscopie à fond noir Pas de coloration nécessaire Microscopie à contraste de phase Microscopie à contraste interférentiel Pas de coloration nécessaire. Permet d'observer le noyau, les centrosomes, la granulation sans coloration préalable Microscopie à fluorescence Les molécules fluorescentes appelées fluorochrome vont absorber les photons à une longueur d'onde d'excitation (visible ou UV). [...]

[...] Microscopie Electronique Microscopie qui utilise un faisceau d'électrons comme source de lumière. La lumière est un faisceau d'électrons ; en transmission le faisceau d'électrons traverse l'échantillon qui doit être relativement mince. On a alors une résolution de 0,1nm Microscopie Electronique à Transmission (MET) 11. Principe du fonctionnement La source d'électrons est un filament métallique chauffé dans un vide poussé. Résolution maximale : 0,1 nm Préparation des échantillons : techniques de routine 1. Fixation : chimique au moyen d'un aldéhyde + O504. [...]

[...] Principe du frottis : goutte entre lame et lamelle pour les cellules circulantes. Dans le cas des tissus, on réalise une apposition tissulaire (idem frottis) ou encore une coupe histologique. Dans le cas des chromosomes, on réalise un caryotype. Dans le cas des coupes histologique, on utilise un fixateur, d'une part pour conserver la structure cellulaire, d'autre part pour perméabiliser la membrane (facilite la pénétration des colorants). Parfois il faut rigidifier les tissu/cellules au moyen de la paraffine (ex : la rate), puis on coupe. [...]

[...] Mise en évidence des phosphates acides en Microscopie Electronique à Transmission Localisation des peroxydes par la diamino- benzydine C. Sondes fluorescentes d'activité métabolique Mise en évidence d'activité magnétique enzymatique due au mécanisme physiologique particulier in situ dans les cellules vivantes. D. Techniques de marquage 1. Principe Ligants = molécule qui a une grande affinité et une grande spécificité pour un composé donné. Marqueurs = c'est la présence de marqueurs qui permet de dire si la molécule recherchée est présentée 2. [...]