Compte-rendu de TP sur la levure Saccharomyces cerevisiae et la bactérie Escherichia coli

Résumé du document

Séance 1

Nous allons travailler sur la levure Saccharomyces cerevisiae. Cet organisme est un eucaryote unicellulaire inférieur, qui est haploïde et qui a deux cycles que l'on caractérise de cycle haplodiplobiontique. On peut donc travailler sur des souches à n ou 2n chromosomes. Deux souches de levures peuvent avoir deux signes sexuels différents, et seules les souches ayant deux signes sexuels différents peuvent complémenter (...)

Extraits

[...] Le lactose est donc l'inducteur de la transcription pour l'opéron lactose. On remarque aussi que l'opéron lactose met un certain temps pour être très fonctionnel puisqu'il faut attendre 120 min pour avoir 25 molécules par bactérie. Lorsqu'il n'y a pas de lactose, donc juste H 2O ou Glucose, il y a synthèse d'un répresseur par l'opéron lactose, qui se fixera sur l'opérateur lui même, et qui empêchera la transcription. Il n'y aura pas de synthèse de β-galactosidase, qui serait inutile pour la cellule, puisque les enzymes (β-galactosidase et perméase) qui sont transcrites et traduites servent à hydrolyser le lactose. [...]

[...] D'après le raisonnement que l'on vient de faire, voici un tableau résumant ce que l'on obtient après les différents croisements des souches B et sur les différents milieux de culture MC+A, MC+T, MC+A+T) : AB MC Diploïde AB MC + A Haploïde A Diploïde AB MC + T Haploïde B Diploïde AB MC + A + T Haploïde A Haploïde B Diploïde AB BC Haploïde C Diploïde BC (si pas de diploïde AC) Haploïde C Diploïde BC (si pas de diploïde AC) Haploïde B Haploïde C Diploïde BC (si pas de diploïde AC) Haploïde B Haploïde C Diploïde BC (si pas de diploïde AC) AC Haploïde C Diploïde AC (si pas de diploïde BC) Haploïde C Haploïde A Diploïde AC (si pas de diploïde BC) Haploïde C Diploïde AC (si pas de diploïde BC) Haploïde A Haploïde C Diploïde AC (si pas de diploïde BC) Pour obtenir ces résultats, il a d'abord fallu déterminer le génotype : ade-, B : trp-) de chaque souche afin de pouvoir comprendre les résultats des croisements qui ont été faits. Voici, pour conclure le schéma qui explique la complémentation. Les cellules sauvages sont donc (prototrophe pour l'adénine) et (prototrophe pour le tryptophane). La souche A est et t+. La souche B est et t-. Puisque les diploïdes AB poussent, alors il y a eu complémentation fonctionnelle, selon le schéma suivant : Séance 2 La levure Saccharomyces cerevisiae a un phénotype qui change lorsque son génotype change. [...]

[...] Manipulation : Dans cette manipulation, il faudra travailler dans des conditions stériles. On désinfectera donc notre paillasse et on fera attention de toujours manipuler dans le cône de stérilité du bec bunsen. Il faut préparer, une semaine à l'avance boites de pétri dans lesquelles il y aura seulement du milieu de culture. Dans chacune de ces boites, on ajoutera des cellules qui seront ADE 2-. Puis, les boites 1 et ne seront pas exposées aux UV. Les boites 3 et 4 seront exposées aux UV pendant 10s. [...]

[...] Afin de pouvoir calculer le taux de mortalité des cellules lors de l'exposition, il faut donc compter le nombre de cellule que l'on met au départ dans chacune des boites. Pour cela, nous allons prélever des cellules ADE que nous allons mettre dans 900 ml d'eau distillée ensuite nous allons effectuer les dilutions suivantes : On compte, grâce à l'hématimètre combien il y a de cellules dans la solution On en compte 110 pour 30 carreaux donc il y a 366 cellules pour 10×10 carreaux soit 3,66 cellule.ml-1. [...]

[...] Les colonies blanches crémeuses ont subi des mutations dans le gène qui sont en amont d'Ade 2 de la voie de biosynthèse de l'adénine. Nous savons que le crémeux est du à la présence des cytochromes C présents dans la mitochondrie. Les colonies blanches n'ont donc pas de cytochrome C et donc pas de mitochondrie. Les cellules blanches ne font plus de respiration cellulaire. On remarque qu'à il y a deux colonies blanches crème Or, cette boite n'a pas été exposée aux UV. On peut donc parler de mutations spontanées. Ces mutations spontanées sont rares, mais elles existent. [...]