La génétique moléculaire (matériel biologique et outils enzymatiques)

Thèmes abordés

biologie moléculaire, génétique moléculaire, matériel biologique, outils enzymatiques, ADN, ARNm, génome humain, nucléases, ligases

Résumé du document

La différence entre biologie moléculaire et génétique moléculaire c'est que la génétique moléculaire s'adresse uniquement à l'étude des maladies génétiques. Le terme de biologie moléculaire est plus vaste.
Les techniques de biologie moléculaire qui vont être appliquées à l'étude du génome humain et à la pathologie (soit héréditaire, soit acquise) vont être pratiquées sur différents matériaux biologiques. Ces matériaux sont :
- l'ADN
- les ARNm
- les ADN complémentaires qui sont extraits à partir de différents tissus ou cellules.

Quasiment tous les types d'échantillons biologiques peuvent être utilisés à partir du moment où on a un noyau et qu'on peut extraire de l'ADN ou de l'ARN.

Extraits

[...] Le terme de biologie moléculaire est plus vaste. Les techniques de biologie moléculaire qui vont être appliquées à l'étude du génome humain et à l pathologie a(soit héréditaire, soit acquise) vont être pratiquées sur différents matériaux biologiques. Ces matériaux sont : l'ADN les ARNm les ADN complémentaires qui sont extraits à partir de différents tissus ou cellules. Préparaton du matériel biologique I - Recueil du spécimen Nature du spécimen Quasiment tous les types d'échantillons biologiques peuvent être utilisés à partir du moment où on a un noyau et qu'on peut extraire de l'ADN ou de l'ARN. [...]

[...] La synthèse se fait dans le sens sans amorce. La présence d'un promoteur est quant à elle nécessaire à leur activité. L'enzyme se fixe sur le promoteur et copie le brin d'ADN. À la différence des ADN polymérases, elles peuvent initier seules un nouveau brin d'ARN. Elles vont être utilisées pour des techniques de séquençage, notamment pour l'insertion d'ADN dans des vecteurs. Ces vecteurs ont souvent des promoteurs différents. Ce sont des promoteurs qui s'appellent Sp6, T3 ou T7. B Les ligases Il en existe 2 types : les ADN ligases les T4 DNA ligases Les ligases assurent la formation de liaisons phosphodiesters entre l'extrémité OH et P de 2 nucléotides terminaux de fragment d'ADN. [...]

[...] Elles peuvent donc s'apparier même si elles ne résultent pas de la coupure d'une même enzyme on dit que ce sont des sites compatibles. Les sites ne sont pas les mêmes mais il coupe au même endroit Par exemple Sau3A à son site contenu dans BamHI La nature du site de restriction va aussi conditionner la fréquence de coupure par l'enzyme correspondante. En effet les enzymes les plus courantes agissant sur des sites à 4 nucléotides vont statistiquement couper plus fréquemment le génome. [...]

[...] Elle est donc capable de générer une extrémité 5'Oh, ce qui fait que quand on a un fragment d'ADN sans extrémité il ne peut plus se religaturer à un autre fragment. C'est une application importante dans le clonage. La T4 polynucléotide kinase est capable de transférer le phosphate en gamma d'un ATP sur le OH. On peut ainsi incorporer si ce 3ème P est marqué au P32, ce P radio-actif dans la séquence d'ADN. C'est donc une façon de marquer une séquence d'ADN. [...]

[...] On aura dans le fond un culot de leucocytes et dans le surnageant c'est le lysat des globules rouges qu'on va éliminer et on va donc se retrouver avec un culot de leucocytes. On les lave. On va ensuite traiter cet échantillon. Il faut lyser d'abord les globules blancs donc on traite : par un mélange de détergent qui permet la lyse des globules blancs et également par des protéases qui vont permettre de digérer les protéines qui sont associées à l'ADN. À ce moment-là on a un mélange d'ADN et de protéines. [...]