Etude de la voie UPR (Unfolded Response Pathway) induite chez la levure en présence de DTT (Dithiothréitol)

Résumé du document

Le réticulum endoplasmique est un organite présent dans les cellules eucaryotes et il est lié à la membrane plasmique. Ses rôles sont de modifier les protéines, produire des macromolécules et transférer des substances en direction de l'appareil de Golgi. Il existe deux types de réticulums endoplasmiques le réticulum endoplasmique lisse et le réticulum endoplasmique rugueux ou granuleux qui nous intéressera au cours de cette séance de Travaux Pratiques. Ce dernier est le siège de la biosynthèse des protéines et le site dans lequel a lieu le repliement de ces dernières.

Extraits

[...] L'activité de la β-galactosidase est reportée dans le Tableau 4. Tableau 4 : Mesure des densités optiques pour les différentes souches de levures (à 420 nm et 550 nm) ainsi que l'activité de la β-galactosidase en fonction du temps d'incubation associé Souches Densités optiques (à 420 nm) Densités optiques (à 550 nm) Temps d'incubation (en min) Activité de la βgalactosidase 7,47207E-07 3,26411E-06 4,84494E-07 9,16457E-06 3,33333E-07 3,07476E-06 6,94531E-06 9,66902E-06 5,94621E-06 9,12706E-06 Y Y (avec DTT) Hac1Δ Hac1Δ (avec DTT) Ire1Δ Ire1Δ (avec DTT) Hac1M Hac1M (avec DTT) Ire1Δ /Hac1M Ire1Δ/Hac1M (avec DTT) Blanc Les Tableaux 3 et 4 ont permis de d'élaborer les Figures 4 et 5. [...]

[...] - Activité beaucoup plus faible que celle existant chez les souches mutantes Hac1M et Ire1Δ/Hac1M. Activité la plus faible par comparaison avec la souche sauvage et les souches mutantes. Activité la plus élevée par comparaison avec celle existant chez la souche sauvage et les souches mutantes. - Activité beaucoup plus élevée que celle existant chez la souche sauvage et la souche mutante Ire1Δ. - Activité légèrement plus faible que celle présente chez la souche mutante Hac1Δ. - Activité plus faible que celle existant chez la souche mutante Ire1Δ Hac1M 3,07476E-06 9,66902E-06 Ire1Δ/Hac1M 9,12706E-06 Hac1M. [...]

[...] Cette résistance se manifeste par la présence de certaines colonies à la surface de la gélose, même si ce nombre est nettement inférieur à celui indiqué lorsque les souches de levures sont cultivées sur un milieu exempt de DTT. Les souches mutantes Hac1Δ et Ire1Δ sont sensibles à la présence du DTT car la voie UPR ne peut pas être induite en absence de ces deux gènes. Ainsi, les cellules s'engagent dans la mort cellulaire programmée ou apoptose et ne poussent pas sur la gélose additionnée en DTT. La voie Unfolded Response Pathway est décrite dans la Figure 6. [...]

[...] Lorsque cette voie de signalisation est activée en présence de l'agent toxique, plusieurs gènes sont ciblés afin de fabriquer les facteurs nécessaires au bon fonctionnement de la voie UPR. Puisque le gène Bip/KAR2 représente l'un des gènes cible de la voie Unfolded Response Pathway l'activation de ce dernier a lieu quand cette voie de signalisation est fonctionnelle. Quand le promoteur de Bip/KAR2 est activé pour participer à la voie UPR, le gène rapporteur lacZ l'est également. Ainsi, le gène lacZ code pour la β-galactosidase de E.Coli. [...]

[...] Test de la sensibilité des souches de levures au Dithiothreitol (DTT) 1. Principe Pour chacune des cinq souches de levures étudiées, il sera nécessaire de réaliser deux dilutions successives à partir d'une suspension cellulaire : une dilution au 1/100 ème et une dilution au ème. Ainsi, à partir de ces solutions solutions par souches étudiées), une mesure de la sensibilité des 5 souches au DTT sera réalisée en utilisant un test en goutte. Pour ce faire, une goutte provenant de chacune des trois solutions sera déposée sur un milieu de culture minimum et un milieu de culture additionné en DTT. [...]