Diagnostic virologique direct

Thèmes abordés

médecine, virologie, Diagnostic virologique, virus, antivirus, infection virale, sérologie, acide cérique, protéine virale, ME Microscopie Electronique, culture virale, culture cellulaire, ECP Effet CytoPathique, IFD ImmunoFluorescence Directe, ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay, génome, PCR Polymerase Chain Reaction, biologie moléculaire, test viral

Résumé du document

Objectifs du cours :
- Différencier diagnostic virologique direct et indirect
- Décrire les différentes techniques de diagnostic direct des infections virales
- Reconnaître les avantages et inconvénients des techniques de diagnostic virologique direct

Extraits

[...] Les échantillons de sang, urine, selles, lavages broncho-alvéolaires liquides céphalorachidiens biopsies d'organes sont, eux, recueillis dans un récipient stérile. Au laboratoire, en attendant la culture, les prélèvements sont conservés entre 2 et 6°C. Si la conservation doit être plus longue avant le traitement > 36h, il est préférable de congeler le prélèvement à -80°C ou en azote liquide. La congélation à -20°C est à proscrire ; elle ne permet pas de conserver l'infectiosité du virus sur une longue période. Il existe trois sources de cellules vivantes. [...]

[...] La sérologie est basée sur la réaction élémentaire Ag-Ac. La détection d'une protéine virale implique l'utilisation d'un Ac de référence : c'est un diagnostic direct. Inversement, la détection d'un Ac sérique nécessite l'utilisation de protéines virales de référence ; il s'agit alors d'un diagnostic indirect. Diagnostic direct Diagnostic indirect + complexe + simple Pratique Échantillons biologiques de sérum facile à obtenir et à nature variée++ conserver Précautions pour le prélèvement, le transport et la conservation Détection par techniques immuno-enzymatiques (automatisées, bien étalonnées) + complexe + simple Pratique Échantillons biologiques de sérum facile à obtenir et à nature variée++ conserver Précautions pour le prélèvement, le transport et la conservation Détection par techniques immuno-enzymatiques (automatisées, bien étalonnées) Règle générale : Le transport au laboratoire doit être immédiat Les Ac, les Ag extracellulaires, l'ADN, les virus nus résistants dans le milieu extérieur sont tous des éléments robustes. [...]

[...] Détection d'Ag solubles par techniques : Immuno-enzymatiques : EIA (Enzyme Immuno Assay) Agglutination de particules de latex Immunochromatographie Immunofluorescence et immunopéroxydase Principe : Les techniques d'immunofluorescence permettent de visualiser directement la présence d'Ag viraux dans les cellules infectées à l'aide d'un Ac spécifique du virus à rechercher, le plus souvent monoclonal, marqué à la fluorescéine. Il peut s'agir d'une immunofluorescence directe (IFD) ou indirecte (IFI). Dans la réaction d'immunopéroxydase, le marqueur fluorescent est remplacé par une enzyme péroxydase, et le substrat de l'enzyme. IFI IFD Applications : - HSV et VZV sur des lésions cutanées. - CMV dans les leucocytes. - Virus respiratoires (virus influenza virus respiratoire syncytial virus parainfluenza (VPI) . ) sur secrétions rhino-pharyngées ou LBA. [...]

[...] Nombre de passages limité : 2 à 3 pour les cellules épithélioïdes, une centaine au maximum pour les cellules fibroblastiques embryonnaires. Lignées continues : Ce sont des cellules qui ont une capacité de prolifération infinie, cellules transformées, immortelles. Elles proviennent soit de tumeurs malignes soit de la transformation spontanée ou viro-induite de cultures primaires ou secondaires. Principales lignées cellulaires utilisées en virologie médicale : La culture cellulaire est réalisée dans un laboratoire de virologie de haut niveau de sécurité, dans des locaux dédiés à cette activité et dotés de postes de sécurité microbiologique (PSM). [...]

[...] L'animal de laboratoire a un grand intérêt dans réalisation des modèles expérimentaux. Il est peu utilisé en routine. Il est indispensable pour la multiplication de certains virus, ex : coxsackievirus du groupe A sur souriceau nouveau-né. L'œuf de poule embryonné a été très utilisé dans le passé (virus grippaux). Actuellement, il est utilisé principalement dans la production de vaccins. Les cellules en culture sont la base du diagnostic virologique. Chaque virus possède un tropisme cellulaire propre. Par conséquent, il n'existe pas de système de culture cellulaire universel. [...]