Techniques de coloration en bactériologie

Résumé du document

Cours sur les principales techniques de colorations en microbiologie. Dans la coloration, toutes les bactéries se colorent, sans distinction. Dans la différenciation, seules certaines bactéries restent colorées et dans la contre-coloration les bactéries dont la coloration a disparu sont colorées par un autre colorant assurant une vision contrastée.

Extraits

[...] Les lames sont immergées pendant 3 heures dans une solution de fuschine. [...]

[...] + formol concentré = 1 vol. [...]

[...] TECHNIQUES DE COLORATIONS EN BACTERIOLOGIE - HEMATOLOGIE PARASITOLOGIE On distingue : - La coloration (Toutes les bactéries se colorent, sans distinction) - La différenciation (Seules certaines bactéries restent colorées) - La contre-coloration (Les bactéries dont la coloration a disparu sont colorées par un autre colorant assurant une vision contrastée) Coloration de GRAM : * Coloration : - Recouvrir l'étalement bactérien préalablement fixé de Cristal violet oxalaté minute) - Rejeter le violet - Recouvrir l'étalement de LUGOL (15 à 20 secondes) - Rejeter le LUGOL - Recouvrir l'étalement de LUGOL (15 à 20 secondes) - Rejeter le LUGOL - Rincer à l'eau du robinet * Différenciation : - Décolorer par Alcool/Acétone en versant goutte à goutte sur la lame inclinée à 10 secondes à surveiller) - Laver à l'eau du robinet * Contre-coloration : - Recolorer par une solution de Safranine (30 secondes) - Laver à l'eau du robinet - Laisser sécher entre 2 feuilles de papier filtre - Examiner au microscope à l'immersion (*1000) - Bactéries colorées en Violet = Bactéries GRAM + - Bactéries colorées en Rose = Bactéries GRAM - Coloration de ZIEHL : * Coloration : - Mettre la lame sur platine chauffante et Recouvrir l'étalement bactérien préalablement fixé de Fuschine phéniquée de ZIEHL (10 minute) Rajouter de temps en temps de la fuschine afin d'éviter la dessication * Différenciation : - Laver à l'eau du robinet - Immerger la lame 2 minutes dans une solution d'acide Nitrique dilué au 1/3 - Laver à l'eau du robinet - Immerger la lame 5 minutes dans une solution d'alcool à - Laver à l'eau du robinet * Contre-coloration : - Recolorer par une solution de Bleu de Méthylène (30 secondes) - Laver à l'eau du robinet - Laisser sécher entre 2 feuilles de papier filtre - Examiner au microscope à l'immersion (*1000) - Bactéries colorées en Rouge = Bacilles acido-alcoolo- résistants Remarque : - La coloration de ZIEHL peut être réalisée à froid. [...]

[...] - On peut utiliser une solution d'acide sulfurique diluée au à la place de l'acide nitrique - On peut remplacer les 2 temps de la décoloration par un mélange acide/alcool que l'on laissera agir 2 minutes - Le réactif d'Armand qui contient de l'acide, de l'alcool et du bleu de méthylène permet de réaliser en un seul temps la décoloration et la recoloration des frottis préalablement colorés à la fuschine Coloration au noir Soudan : * Coloration : - Couper 3 à 4 ( congelés - Placer les lames 1 heure dans le BAKER (CaCL H2O à 10% = 1 vol. [...]