La numération cellulaire

Résumé du document

Cours de méthodologie dont le sujet est : Comment réaliser une détermination exacte du grossissement d'un vers parasite chez un sanglier et une numération cellulaire au moyen de la cellule de Malassez ? La cellule de Malassez permet une numération cellulaire à partir d'un volume précis et connu.

Extraits

[...] L'objectif est à 2,5 et l'oculaire à x10. On réalise ensuite une estimation du grossissement en superposant les micromètres oculaire et objectif. Il faut tourner l'oculaire de mesure dans le tube pour superposer les divisions du micromètre oculaire à celle du micromètre objectif. On doit obtenir une vision nette et simultanée des divisions de l'échelle du micromètre objectif et de celles de l'échelle de l'oculaire, sans constater de parallaxe (voir schéma 2.) Schéma 2 : Superposition des micromètres, avec a = oculaire et b = objectif On détermine le nombre de divisions de l'échelle du micromètre oculaire qui correspond à un nombre entier de divisions de l'échelle du micromètre objectif Pour le microscope optique, on obtient les résultats suivants : au grossissement x2, 1mm correspond à 21 graduations au grossissement x10, 1mm correspond à 80,5 graduations au grossissement x20, 0,1mm correspond à 16 graduations Ce dernier va nous permettre de mesurer la largeur de Metastrongylus. [...]

[...] On estime que des coupes sont bonnes aux environs de 7nm d'épaisseur Méthodes de détermination d'un grossissement au moyen des micromètres Etalonnage des micromètres et préparation des vers parasites à étudier Pour déterminer un grossissement, on utilise un micromètre objectif (ou micromètre objet), qui est en fait une lamelle dans laquelle une graduation d'un millimètre y a été inscrite au centre d'un cercle(voir schéma 1). Ce millimètre est subdivisé en 100 divisions. Le micromètre sera placé sur la platine du microscope ou de la loupe. On dispose également d'un micromètre oculaire, qui se localise dans le tube oculaire droit d'observation. (Positionnement des micromètres indiqué sur la figure 1.) Schéma 1 : Un micromètre objectif 3 Figure 1 : Positionnement des micromètres sur un appareil d'observation Dans un premier temps, il faut étalonner le micromètre objectif. [...]

[...] Les graduations ne changent pas, elles ne correspondent pas à un grossissement et ne dépendent pas de l'oculaire. L'écartement entre mes yeux est de 59mm. Nous allons ensuite dessiner ces vers, les mesurer, et enfin déterminer une échelle de dimensions exactes par calcul de leur longueur et de leur largeur. On va donc passer d'une observation rapide, au moyen des dessins, à une observation exacte, grâce aux appareils. En dernier lieu, nous déterminerons la quantité de bactéries présentes dans 1 litre d'eau croupie, au moyen de la cellule de Malassez. [...]

[...] Le vers 2 a donc une longueur de 21,7mm. Les femelles sont plus grandes que les males, on peut donc supposer que le vers 1 est une femelle. Au microscope optique Le microscope optique nous permet de déterminer la largeur des vers. vers 1 : au grossissement x10, il représente 32 graduations. On sait qu'1mm correspond pour ce grossissement à 80,5 graduations donc, pour 32 graduations on aura : 32 x 1 / 80,5 = 0,40mm Le vers 1 a donc une largeur de 400 microns vers 2 : au grossissement x10, il correspond à 36 graduations. [...]

[...] L'éclairage est diascopique. Les objets seront observés par transparence, ils devront donc être de petite taille, leur épaisseur ne devra pas dépasser quelques microns. Ils pourront être observés vivants, morts, colorés ou non colorés. Le pouvoir séparateur du microscope photonique, bien que plus important que celui de l'œil ou de la loupe, est limité par des contraintes physiques. On obtient de meilleurs résultats en insérant de l'huile à immersion entre l'objectif et l'objet. On peut alors atteindre le grossissement limite d'environ 1000 fois. [...]