Le dosage du complément sérique de cobaye par la méthode de l'hémolyse 50%

Résumé du document

Le CAM repose sur le principe de fuite d'eau et d'électrolytes qui induit la lyse cellulaire. Pour cela, des peptides (C9) vont se polymériser en s'enchâssant dans les parois et membranes afin de former des canaux de fuite (...)

Extraits

[...] Cette mise en contact permet la formation de complexe Antigène (GRM) Anticorps. En effet, les anticorps présents dans le sérum de lapin reconnaissent les GRM comme des cellules étrangères. Ce mélange correspond à une dilution au On vérifie la DO pour s'assurer qu'il n'y a pas eu d'erreurs de dilution ou de manipulation. Comme on vient de réaliser une dilution au la DO à 100% d'hémolyse doit être divisée par 2. On mélange toujours 1 ml de GRM sensibilisés dans 3 ml d'eau distillée. [...]

[...] Cette partie de C4 clivera le facteur C2 tout en gardant une liaison avec la partie catalytique générée. On obtient ainsi le facteur C4b2a qui correspond en fait à la C3 convertase. Voie dépendante des lectines Cette voie nécessite qu'une lectine plasmatique, la MBL, soit liée aux mannoses des glycoprotéines de surface des micro-organismes. La MBL est synthétisée par le foie lors de la phase aiguë de l'inflammation. Cette liaison permettra l'activation de MASP1 et MASP2. Les enzymes vont cliver le facteur C4 et C2 qui s'associeront en C4b2a, c'est à dire la C3 convertase. [...]

[...] Suivant la teinte de cette dernière, le pourcentage de lumière va diminuer. Un capteur recueille les données. Cette technique est utilisée afin de créer une courbe d'absorbance, qui indiquera la densité optique de la solution en fonction de la concentration de celle-ci. La courbe pourra ensuite être utilisée comme étalon pour déterminer une concentration inconnue. En trouvant la concentration de sérum nécessaire à la lyse de 100% des GRM (sur le graphique, cela se traduit par un plateau), on peut calculer (en divisant la DO correspondant à 100% d'hémolyse par 2 et en trouvant la concentration correspondante en utilisant la partie linéaire de la courbe) le titre de la solution capable d'hémolyser 50% des GRM. [...]

[...] Les protéines du complément agissent en cascade afin de lyser les cellules du Non Soi. Dans cette expérimentation, nous cherchons à déterminer la quantité de sérum frais de cobaye (donc de complément) capable d'hémolyser 50% de 1 ml de globules rouges de mouton (GRM) sensibilisés. I. Rappels sur le complément Le complément conduit à la production de différents peptides qui auront divers rôles dans l'immunité. Le principal est la formation du complexe d'attaque membranaire (CAM) qui permet la lyse des pathogènes. [...]

[...] Le complexe C5b67 devenu hydrophobe va s'enchâsser dans la membrane du pathogène puis va fixer le facteur C8. Ce gros complexe va recruter des facteurs C9 qui en se polymérisant formera le complexe d'attaque membranaire, c'est à dire le pore lytique. II. Matériel et Méthode 1. Principe On recherche la quantité de sérum frais de cobaye capable d'hémolyser 50% de GRM sensibilisés. Lorsqu'ils sont détruits, les GRM vont libérer dans le milieu leur contenu cellulaire dont l'hémoglobine, de couleur rouge. [...]