La mutation Callipyge

Résumé du document

Le phénotype callipyge du mouton constitue un modèle mammifère passionnant qui pourrait nous aider à mieux comprendre la fonction et la régulation de gènes localisés dans un vaste domaine soumis à l'empreinte parentale. Son intérêt principal est son mode de transmission non mendélien qualifié de surdominance polaire, où seuls les animaux ayant reçu un allèle muté de leur père et un allèle sauvage de leur mère expriment le phénotype ... Mémoire de 16000 mots sur la mutation du phénotype callipyge. Document très complet sur un sujet pointu mais où vous retrouverez toutes les informations souhaitées sur le sujet.

Extraits

[...] Les 400 Kb ont été complètement séquencés en collaboration avec le Génoscope. L'annotation in silico de la partie centrale de cet intervalle a permis de prédire et ensuite de confirmer expérimentalement l'existence de quatre gènes dans cette région : DLK1, GTL2, PEG11 et MEG8, ainsi que deux transcrits associés : DAT et anti- PEG11. DLK1 et PEG11 codent respectivement pour une protéine homéotique comportant six répétitions de type EGF et pour une protéine homologue aux polyprotéines gag et pol des rétroéléments de type Gypsy. [...]

[...] Le degré de confluence a été estimé approximativement sous microscope, il atteint 50 à 80% dans ces conditions. La photo suivante montre des cellules C2C12 en prolifération, à un degré de confluence estimé à (à gauche) et différenciées (à droite): Trois boîtes de 35mm de cellules C2C12 en prolifération à un degré de confluence compris entre 50 et 80% ont été préparées pour la transfection de chacune des constructions Delta-12 et vecteur vide). Pour chaque expérience de transfection, des boîtes présentant un degré de confluence similaire ont été choisies pour chacune des quatre constructions - Dosage de l'activité luciférase L'obtention de résultats satisfaisants au niveau reproductibilité a nécessité une série de mises au point qui sont détaillées en annexe. [...]

[...] L'expression et la mesure simultanée, dans le même système, d'une deuxième enzyme luciférase rapporteuse (dans notre cas il s'agira de la renilla luciférase), ayant un substrat spécifique différent, rend possible la comparaison de l'activité du promoteur étudié dans les différentes situations expérimentales, dans notre cas, il s'agira de la présence des différents allèles G ou Delta-12) en 5' du promoteur. Cette luciférase contrôle permet en effet la normalisation des résultats d'une expérience à l'autre. Figure Réactions bioluminescentes catalysées par les luciférases firefly et renilla. La figure 8 illustre les réactions bioluminescentes catalysées par les deux types de luciférase que nous utiliserons: la firefly et la renilla luciférase. Le vecteur rapporteur qui a été choisi pour normaliser les résultats obtenus lors des différentes expériences est le vecteur phRG-TK (GenBank Accession AF36255). [...]

[...] Baraldi, voir introduction). En bref, ces bras d'homologie ont été amplifiés à partir d'ADN génomique murin, puis clonés dans le vecteur pcDNA3 à l'aide du kit de T/A cloning (Invitrogen). Les modifications, à savoir la délétion de 12pb ou le remplacement de A par ont été réalisées dans ce vecteur par mutagenèse dirigée à l'aide du kit GeneTailorTM Site-Directed Mutagenesis System (Invitrogen, Merelbeke, Belgique). Les amorces utilisées pour amplifier un insert de 1050 pb (allèles A et ou de 1038 pb (allèle Delta-12) ont été désignées dans la séquence génomique souris flanquant la région orthologue de la mutation callipyge (Boîte 1). [...]

[...] Pour rappel, seuls les animaux ayant reçu la mutation de leur père expriment le phénotype, les animaux homozygotes pour la mutation étant de phénotype normal. D'autre part, niveau ARN, ces deux classes génotypiques surexpriment les gènes codant pour des protéines (DLK1 et PEG11), elles se différencient donc uniquement par le fait que seuls les homozygotes mutés surexpriment également les ARNs non codants (GTL2 et MEG8) (Figure 4A). L'hypothèse émise est que le phénotype est dû aux gènes codant pour des protéines (DLK1 et/ou PEG11). [...]