L'exploration des protéines plasmatiques

Résumé du document

Cours de biochimie adapté aux étudiants de deuxième année de BTS Analyses Biologiques. Il est présenté de façon simple et regroupe l'essentiel sur l'exploration biochimique des protéines. Celui-ci présente en trois pages les différentes techniques de dosage et d'étude des protéines plasmatiques. Pour conclure, une quatrième page est consacrée à l'étude des protéines sériques.

Extraits

[...] L'étude des protéines plasmatiques est réalisée grâce : - au dosage des protéines plasmatiques totales, - au dosage de certaines catégories de protéines plasmatiques permettant d'établir un profil protéique - à l'électrophorèse des protéines plasmatiques, - complétés éventuellement par l'étude des protéines urinaires (protéinurie). I DOSAGES PROTEIQUES 1. Dosage des protéines totales plasmatiques Réalisé classiquement par la technique du biuret, plus ou moins modifiée pour s'adapter aux différents automates. Sur le plasma, plutôt que sur le sérum, donc avec le fibrinogène à 4 Revoir le principe de la méthode du biuret (TP de biochimie de 1ère année). Méthode peu sensible, mais suffisante compte tenu de la concentration élevée des protéines dans le plasma. [...]

[...] Permet d'orienter un diagnostic. Profil minimum ou ciblé : Réalisé avec les résultats des dosages de 2 à 3 protéines différentes. Utilisé pour le suivi d'un processus inflammatoire, en particulier après une intervention chirurgicale. II ELECTROPHORESES DES PROTEINES SERIQUES 1. Obtention et interprétation d'un protéinogramme Toujours réalisé sur le sérum et non pas sur le plasma pour éliminer le fibrinogène qui masque les pics de β et γ globulines. Grâce à une coloration des protéines, non spécifique, permet de visualiser les 5 classes de protéines sériques Principe et protocole : voir TP Lecture de l'électrophorégramme au densitomètre : l'appareil mesure l'absorption de lumière en chaque point de la bande et trace le graphe correspondant, avec 5 pics correspondant aux 5 classes de protéines sériques Interprétation des résultats 1. [...]

[...] En France, les déperditions sont plus fréquentes. Origines possibles des défauts de synthèse de l'albumine : - apport protéique alimentaire insuffisant, en cas de malnutrition, - problèmes digestifs : mauvaise digestion des protéines, ou mauvaise assimilation intestinale des acides aminés, - problèmes hépatiques graves: cirrhoses, ictères, - synthèse anormalement élevée d'autres protéines (mécanisme de compétition) : syndromes inflammatoires, γ pathies monoclonales. Origines possibles des déperditions : - perte rénale : très importante dans les syndromes néphrotiques, - perte digestive : - perte cutanée dans les brûlures étendues Hypoglobulinémies Ce sont des hypo ou des a γ globulinémies, dues : - soit à des pertes rénales ou digestives, - soit à des défauts de synthèse rencontrés dans des déficits du système immunitaire, par ex. [...]

[...] D'autres types de méthodes existent, en particulier les méthodes immuno- enzymatiques Immunoélectrophorèse et immunofixation Ces techniques permettent, à l'aide d'anticorps spécifiques, de visualiser et donc d'identifier certaines protéines particulières sur des gels d'électrophorèse des protéines sériques Immunoélectrophorèse Après avoir effectué l'électrophorèse des protéines sériques en gel d'agarose, on réalise une immunodiffusion double à l'aide d'antisérums spécifiques déposés dans des gouttières parallèles à l'axe de la migration électrophorétique. Après diffusion des Ag et des Ac dans le gel, les complexes Ag-Ac précipitent sous forme d'arcs qui permettent de visualiser la présence des protéines recherchées Immunofixation C'est une technique plus rapide et plus performante que l'immunoélectrophorèse. Elle est particulièrement utile pour le typage des protéines monoclonales des myélomes. En effet, elle permet de distinguer la classe de l'immunoglobuline monoclonale (IgG, IgA, IgM, IgD, ou IgE) et de préciser si elle contient des chaînes légères kappa ou lambda (λ). [...]

[...] L'augmentation peut ne concerner que les γ globulines avec un pic arrondi et étalé. S'observe fréquemment dans les infections, les maladies auto-immunes, les allergies telles que l'asthme où les IgE sont augmentées Hyperglobulinémies monoclonales ou γ pathies monoclonales Il s'agit de la synthèse anormale d'une seule immunoglobuline par un clone cellulaire de lymphocyte B en voie de prolifération anarchique. Donne sur l'électrophorèse un pic fin et bien visible au sein des γ globulines. EXPLORATION DES PROTEINES SERIQUES UTILISATION DE TECHNIQUES IMMUNOLOGIQUES Dosage de protéines particulières Chacune des protéines plasmatiques peut être dosée de façon spécifique par des méthodes immunologiques à l'aide d'anticorps spécifiques. [...]