Synthèse d'anticorps in vitro : technique des plages de lyse

Résumé du document

Il existe deux types de mécanismes de défense :
- Les mécanismes de défense non-spécifique (ou immunité naturelle), comme la protection de la peau et les muqueuses, l'acidité gastrique, les cellules phagocytaires,...
- Les mécanismes de défense spécifique (immunité acquise), comme l'action dirigée des lymphocytes et la production d'anticorps spécifiques.(...)

Extraits

[...] Représentation schématique de la cascade d'activation du complément. Exploitation de la séance : 3 But du TP : Mettre en évidence la synthèse d'anticorps in vitro par des plasmocytes pré- immunisés (ici par des globules rouges de mouton), avec la technique des plages de lyse Principe : Les splénocytes d'une souris préalablement immunisée contre les globules rouges de mouton (GRM) sont mis en solution et répartis en 2 lots : - une lame témoin contenant des GRM et du RPMI 10 - une lame essai contenant des GRM et du complément Les 2 lots sont incubés 1h à 37°C et observés par la suite au microscope (grossissement 10x) 9 Matériel : Matériel biologique : - une rate de souris fraîchement prélevée - Des globules rouges de mouton - Complément Matériel non biologique : - Eau distillée - PBS - RPMI 10 - Vortex - Centrifugeuse - Lames vides - Balance 10 Déroulement de la séance : Préparation de la suspension des splénocytes à 106 splénocytes/ml: Méthode du choc hypotonique Préparation de la suspension de GRM à 20%. [...]

[...] Un anticorps (aussi appelé immunoglobuline) est une glycoprotéine complexe, présente dans les liquides biologiques de tous les mammifères, utilisée pour détecter et neutraliser les agents pathogènes. Les anticorps sont sécrétés par les plasmocytes (des cellules dérivées des lymphocytes et sont capables de reconnaître des antigènes de manière spécifique. Cette famille de molécules présente une extrême variabilité (du fait d'un grand nombre de recombinaisons génétiques possibles). On peut les retrouver exprimées à 2 endroits : - surface des cellules B (anticorps de surface) - forme circulante dans le sans ou la lymphe (anticorps) Comme il le sera précisé par la suite, il existe plusieurs classes d'anticorps, ayant des structures et des rôles variables. [...]

[...] Les IgM : Ils peuvent former de pentamères, ce qui leur confère un haut pouvoir d'agglutination. C'est la première classe d'anticorps produit au cour de la réponse immune. Présents à une concentration de 1,5g.L-1, ils fixent le complément de façon très efficace du fait de leur structure polymérique. Le facteur C1 du complément doit se lier à deux fragments Fc pour induire la cascade d'activation du complément. Ils peuvent agir comme opsonines mais seulement lorsque les phagocytes sont déjà activés. Cet isotype est la forme la plus ancienne d'immunoglobulines crées par les Vertébrés. [...]

[...] C'est ce qui se passe dans ce TP et permet l'apparition des plages de lyse. Le facteur C1 du complément se lie sur le fragment Fc. C'est cet événement qui va initier la cascade d'activation du complément et ceci va aider au recrutement et à l'activation des phagocytes qui vont pouvoir détruire l'antigène. Cette activation de la voie classique est, plus précisément, l'œuvre des IgG et des IgM. Toutefois, une seule molécule d'IgM suffit à activer la voie, tandis qu'il faut 2 molécules IgG pour le même effet. [...]

[...] Les IgE : Ils ne sont, eux aussi, présents qu'a l'état de trace dans le corps humain (concentration = 100 g.L-1). Ils se lient aux récepteurs Fc de haute affinité exprimés à la surface des mastocytes et blastocytes. Ces cellules vont relarguer, après avoir fixer l'antigène, certains médiateurs pharmacologiquement actifs comme l'histamine. Ils sont particulièrement importants dans la protection contre les infections parasitaires. Ils sont responsables d'hypersensibilité comme l'asthme et le rhume des foins. Ils jouent aussi un rôle important dans les allergies alimentaires. [...]